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酵母单杂交文库挑选技术服务

我们具有多年的文库构建和挑选履历,已完成数千个各种文库,定单来自海内外,能够有用包管文库的掩盖度和文库挑选目标基因的检出。

  • 产物详情

酵母单杂交文库挑选技术服务(运用clonetechpGADT7大概pGADT7-Rec2两套体系停止挑选,能够运用预制商业化文库大概本公司定制构建的酵母杂交文库)

  1.酵母单杂交的基本原理

       酵母单杂交手艺是1993年由酵母双杂交技术发展而去的,其基本原理为:实核生物基因的转录肇端需转录因子到场,转录因子一般由一个DNA特异性联合功用域和一个或多个其他调控卵白相互作用的激活功用域构成,即DNA联合构造域(DNA—bindingdomain,BD)和转录激活构造域(activationdomain,AD)。用于酵母单杂交体系的酵母GAL4卵白是一种典范的转录因子,GAL4的DNA联合构造域接近羧基端,含有几个锌指构造,可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS),而转录激活构造域可取RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用,进步RNA聚合酶的活性。正在那一历程中,DNA联合构造域和转录激活构造域可完整独登时发挥作用。据此,我们可将GAL4的DNA联合构造域置换为文库卵白编码基因,只要其表达的卵白能取目标基因相互作用,一样可经由过程转录激活构造域激活RNA聚合酶,启动下流讲演基因的转录。                                 

 2.酵母单杂交手艺的特性

        酵母单杂交系统自1993年由Wang和Reed建立以来,正在生物学研讨发域中曾经显现出伟大的能力。运用酵母单杂交系统曾经考证了很多已知的DNA取蛋白质之间的相互作用,同时发明了新的DNA取蛋白质的相互作用,并由此找到了多种新的转录因子。最近,已有运用酵母单杂交系统停止疾病诊断的研讨报导。跟着酵母单杂交系统的不断发展和完美,它正在科研、医疗等方面的运用将会愈来愈普遍。接纳酵母单杂交系统能正在一个简朴实行历程中,辨认取DNA特异联合的蛋白质,同时可间接从基因文库中找到编码卵白的DNA序列,而无需星散纯化卵白,实行简单易行。因为酵母单杂交系统检测到的取DNA联合的蛋白质是处于天然构象,战胜了体外研讨时蛋白质一般处于非自然构象的瑕玷,因此具有很下的灵敏性。现在,多种酵母单杂交系统的试剂盒和响应的cDNA文库曾经商品化,为酵母单杂交系统的运用供应了有益的前提。
    但酵母单杂交也存在以下瑕玷:偶然因为插入的靶元件取酵母内源转录激活因子可能发生相互作用,或插入的靶元件不需要转录激活因子便能够激活讲演基因的转录,因而每每发生假阳性效果。若是酵母表达的AD融会卵白对细胞有毒性,或融会卵白正在宿主细胞内不克不及稳固天表达,或融会卵白发作毛病折叠,大概不克不及定位于酵母细胞核内,和融会的Gal4AD关闭了蛋白质上取DNA相互作用的位点,则皆能够滋扰AD融会卵白联合于靶元件的才能,从而发生假阴性效果。

 3.酵母单杂交的根基操作过程

     (1)设想露目标基因(称为钓饵)和下流讲演基因的质粒,并将其转入酵母细胞。
    (2)将文库卵白的编码基因片断取GAL4转录激活域融会表达的cDNA文库质粒转化人统一酵母中。
    (3)若文库卵白取目标基因相互作用,可经由过程讲演基因的表达将文库卵白的编码基因挑选出来。正在这里作为钓饵的目标基因就是启动子DNA片断,文库基因所编码的卵白就是启动子基因联合卵白。

 4.酵母单杂交手艺的用处

      迄今为止,运用酵母单杂交系统曾经辨认并考证了很多取目标DNA序列联合的蛋白质,同时单杂交手艺借被应用于辨认金属回响反映联合因子。正向取反向单杂交系统的联合,借可用于挑选障碍DNA取蛋白质相互作用的突变的单个核苷酸. 现在,正在研讨DNA—蛋白质相互作用中,酵母单杂交系统重要有以下3种用处:①肯定已知DNA—蛋白质之间是不是存在相互作用;②星散联合于目标顺式调控元件或其他短DNA联合位点卵白的新基因;③定位曾经证明的具有相互作用的DNA联合卵白的DNA联合构造域,和正确定位取DNA联合的核苷酸序列。

 5.我们的事情内容

    您只需供应用于挑选的钓饵质粒信息,我们会完成全部的挑选事情,重要包孕以下内容:
    3.1 钓饵载体的构建
    3.2 钓饵质粒的自激活检测
    3.3 文库质粒和钓饵质粒共转酵母感受态细胞
    3.4 文库挑选和3AT优化
    3.5 文库挑选效果测序剖析
    3.6 挑选效果回转考证
    3.7 具体讲演的整顿和数据发送

 6.托付效果

    供应具体的、完好的实行讲演,清楚的实行图片,挑选效果的测序效果,质粒等。

 7.服务报价

    3万元整

 8.服务周期

    80个工作日

9.客户文章示例

核蛋白酵母双杂交文库客户文章示例:

【1】Yeast-2-Hybrid data file showing progranulin interactions in human fetal brain and bone marrow libraries[J],ata in Brief, Volume 9, December 2016, Pages 1060-1062

【2】Zhenhai Yu, Yingying Ge, Lei Xie,et al. Using a yeast two-hybrid system to identify FTCD as a new regulator for HIF-1α in HepG2 cells[J],Cellular Signalling, Volume 26, Issue 7, July 2014, Pages 1560-1566

【3】Zhanyang Yu,1 Ning Liu,1 Yi Wang,2 Xiaokun Li,et al. Identification of Neuroglobin-interacting Proteins Using Yeast Two-hybrid Screening. Neuroscience. 2012 Jan 3; 200: 99–105.

【4】Cui LG, Shan JX, Shi M, et al. DCA1 Acts as a Transcriptional Co-activator of DST and Contributes to Drought and Salt Tolerance in Rice. PLoS Genet. 11, e1005617 (2015).

【5】Jing Ning, Baocai Zhang, Nili Wang, Increased Leaf Angle1, a Raf-Like MAPKKK That Interacts with a Nuclear Protein Family, Regulates Mechanical Tissue Formation in the Lamina Joint of Rice. The Plant Cell, Vol. 23: 4334–4347, December 2011.

【6】Raksha Singh, Mi-Ok Lee, Jae-Eun Lee, Jihyun Choi, Rice Mitogen-Activated Protein Kinase Interactome Analysis Using the Yeast Two-Hybrid System. Plant Physiology, September 2012.Vol.160,

【7】X.F.Zha, M.Zhao, C.Y.Zhou, H.Z.Guo. Analysis of interaction between Bmhrp28 and BmPSI in sex-specific splicing of Bombyx mori Bmdsx gene. Genetics and Molecular Research 13 (3): 5452-5462 (2014)

【8】Chao Zhang, Rongchao Ge, Junwen Zhang, Identification and Expression Analysis of a Novel HbCIPK2-Interacting Ferredoxin from Halophyte H. brevisubulatum.PLOS. December 4, 2015.

【9】Deng X1, Guo D2, Yang S1, Shi M1, Chao J1, Li H2, Peng S2, Tian W1. Jasmonate signalling in the regulation of rubber biosynthesis in laticifer cells of rubber tree, Hevea brasiliensis. J Exp Bot. 2018 Jun 27;69(15):3559-3571. doi: 10.1093/jxb/ery169.


酵母单杂交文库客户文章示例:

【1】Nobutaka Mitsuda,Miho Ikeda,Shinobu Takada,et al.Efficient Yeast One-/Two-Hybrid Screening Using a Library Composed Only of Transcription Factors in Arabidopsis thaliana.Plant Cell Physiol (2010) 51 (12): 2145-2151.

【2】Chang-Qing Yang1, Xin Fang1, Xiu-Ming Wu1, et al. Transcriptional Regulation of Plant Secondary Metabolism. Journal of Integrative Plant Biology 2012, 54 (10): 703–712

【3】Zejun Huang, Zhijin Zhang, Xiuling Zhang,et al. Tomato TERF1 modulates ethylene response and enhances osmotic stress tolerance by activating expression of downstream genes. FEBS Letters.Volume 573, Issues 1–3, 27 August 2004, Pages 110-116

【4】Deng X1, Guo D2, Yang S1, Shi M1, Chao J1, Li H2, Peng S2, Tian W1. Jasmonate signalling in the regulation of rubber biosynthesis in laticifer cells of rubber tree, Hevea brasiliensis. J Exp Bot. 2018 Jun 27;69(15):3559-3571. doi: 10.1093/jxb/ery169.

膜蛋白双杂交文库客户文章示例:

【1】Yasuyuki Nakamura, Jun Ishii, Akihiko Kondo. Rapid, Facile Detection of Heterodimer Partners for Target Human G-Protein-Coupled Receptors Using a Modified Split-Ubiquitin Membrane Yeast Two-Hybrid System.PLOS one. June 2013 , Volume 8 ,Issue 6.

【2】Zhe Ma, Hui Zhang, Junxi Zheng. Interaction between M-Like Protein and Macrophage Thioredoxin Facilitates Antiphagocytosis for Streptococcus equi ssp. Zooepidemicus.PLOS one. February 2012 ,Volume 7, Issue 2.

【3】Pratima Pandey and Singh Harbinder. The Caenorhabditis elegans D2-like dopamine receptor DOP-2 physically interacts with GPA-14, a Gαi subunit. Pandey and Harbinder Journal of Molecular Signaling 2012.

 中文论文:

【1】张云云,周 君, 李 晔. 适口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)酵母双杂交文库和铁联合卵白实核表达载体的构建. 陆地取湖沼,44卷,第6期。

【2】欧阳沫, 唐潇,黄惜,袁红梅。巴西橡胶树HbICE1 基因酵母双杂交钓饵载体的构建及互做卵白的挑选。动物科学学报,2016,34(2): 255~262.

【3】岳珊珊,夏来新。酵母双杂交挑选取果蝇C(2)M相互作用的卵白。遗传,2015.11,37(11)

【4】专利:一种联合串连反复序列(TTTACAC)5的Dof蛋白质



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