酵母双杂交文库挑选服务

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我们具有多年的文库构建和挑选履历,已完成数千个各种文库,定单来自海内外,能够有用包管文库的掩盖度和文库挑选目标基因的检出。

  • 产物详情

酵母双杂交文库挑选:
 
一、核蛋白酵母双杂交文库挑选技术服务(能够挑选运用invitrogenpDEST22clonetechpGADT7两套体系停止挑选,能够运用预制商业化文库大概本公司定制构建的酵母杂交文库)

1.实行道理

    卵白的酵母双杂交实行是以酵母的遗传剖析为根蒂根基,研讨反式感化因子之间的相互作用对实核基因转录调控影响的实行。很早就已晓得,转录活化卵白能够和DNA上特异的序列联合而启动响应基因的转录回响反映。这类DNA 联合取转录激活的功用是由转录活化卵白上两个互相自力的构造域即DNA 联合构造域(BindingDomain, BD)和转录活化构造域(Activation Domain,AD)离别去完成的,而且那两个构造域关于基因的转录活化都是必需的。现在酵母双杂交实行接纳的体系有LexA体系和Gal4体系两种。正在LexA体系中,DNA联合构造域由一个完好的本核蛋白LexA组成,转录活化构造域则由一个88个氨基酸的酸性的大肠杆菌多肽B42组成,它正在酵母中能够活化基因的转录; 正在Gal4体系中,BD和AD离别由Gal4卵白上差别的两个构造域(1-147aa取768-881aa)组成。正在应用GAL4体系挑选cDNA文库或研讨卵白间的互相做用时,DNA联合构造域取靶卵白即"钓饵"相结合,转录活化构造域取文库卵白或要考证的卵白相结合。一般情况下,零丁的BD能够取GAL4上游活化序列(GALUAS)联合但不克不及引发转录,零丁的AD则不克不及取GALUAS联合,只要当BD取AD离别表达的融会卵白因为相互作用而致使二者正在空间上互相接近时,BD取AD才气取GALUAS联合而且引发报导基因的转录。正在BD取AD要导入的酵母菌AH109中,经由过程基因工程的要领正在GAL4 UASs和启动子的下流构建了3个报导基因--ADE2,HIS3,MEL1(或LacZ),因而能够经由过程营养缺点挑选和酵母菌表型的改动去挑选或考证两个卵白之间是不是存在相互作用。GAL4体系的道理如图所示


                                  

酵母双杂交体系事情道理

2.体系特性

   同以往研讨蛋白质-蛋白质之间相互作用的实行手腕比拟,双杂交体系具有其奇特上风。起首,融会体卵白之间的相互作用是正在实核酵母细胞内停止,蛋白质有可能连结自然的折叠状况,相似其正在体内心理状况下的状况,那是其他离体生化磨练要领所缺少的,因而较之后者,它所证明的蛋白质间相互作用将更靠近于正在体的实在程度。其次,双杂交体系的敏感度即下,能够检测到正在蛋白质之间联合常数低至1mmol/L 阁下的微小感化。很多微小或长久的蛋白质之间的相互作用能够借助报导基因表达历程中的多级放大效应反应出来;融会卵白基因正在强启动子的感化下,处于较下的表达程度。第三,正在挑选cDNA 文库时,双杂交体系可以或许简便天获得编码相互作用卵白的基因序列,它只需构建质粒而没必要预备抗体或纯化卵白,省略了别的体外检测卵白之间相互作用要领所必需的卵白抽提、纯化等烦琐步调。 
    需求指出的是,融会体卵白必需转运至核内才气活化转录,因而关于胞外配体-受体感化和需求核中润饰或受磷酸化等翻译后润饰历程介导的蛋白质间相互作用而言,该体系的运用遭到一些限定。正在停止文库挑选时,假阳性效果经常滋扰实行的准确性,除某些文库编码的蛋白质自己含有转录活化成特别,细胞内的别的无关卵白也能够有相似感化,因而双杂交体系检测的效果必需经由过程别的卵白间相互作用的实行去进一步考证。

3. 我们的事情内容

    您只需供应用于挑选的钓饵质粒信息,我们会完成全部的挑选事情,重要包孕以下内容:
3.1 钓饵载体的构建
3.2 钓饵质粒的自激活检测
3.3 文库质粒和钓饵质粒共转酵母感受态细胞
3.4 文库挑选和3AT优化
3.5 文库挑选效果测序剖析
3.6 挑选效果回转考证
3.7 具体讲演的整顿和数据发送

4.托付效果

供应具体的、完好的实行讲演,清楚的实行图片,挑选效果的测序效果,质粒等。

5.服务报价

3万元整

6.服务周期

80个工作日


二、膜蛋白酵母双杂交文库挑选技术服务(运用DUALmembrane 手艺体系)

1. DUALmembrane 手艺道理

    DUALmembrane 手艺正在传统的酵母双杂交体系的基础上,奇妙天应用星散的泛 素体系(split-ubiquitin)停止跨膜蛋白相互作用的挑选。

    星散的泛素体系(split-ubiquitin) 泛素能够工资分红两局部:N 端(Nub),C 端(Cub)。

  

    一般状况下,Nub 和 Cub 仍具 有很高的亲协力,表现出野生型 泛素的功用,即仍施展降解卵白 量的旌旗灯号功用。

   那么怎样将泛素体系和酵母双杂交融会成一体呢?

   起首,人为地将泛素 Nub 的 3 位异亮氨酸突变为甘氨酸(NubI 突变为 NubG)。 如许取 Cub 的亲协力大大低落,制止了 Cub 和 Nub 自我联合或靠近的可能性;。

   其次,将 Cub 局部取人工合成的 LexA-VP16 转录激活因子融会成一个融会卵白Cub-LexA-VP16。因而一般条件下 NubG 不取 Cub 联合,UBPs 也不能辨认星散的泛素,转录激 活因子也不会被切下去。最初,将要检测的蛋白质离别取 NubG 和 Cub 融会,构成 bait 融会卵白(bait-cub-LexA-VP16)和 prey 融会卵白(prey-NubG)。若是 bait 和 prey 发 死相互作用,便会促使 NubG 和 Cub 的互相靠近,从而获得重构,被 UBPs 识 别,致使 LexA-VP16 的解离,进入核内,从而激活讲演基因的转录。

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2.体系特性

  能够挑选跨膜蛋白间的相互作用,消弭酵母双杂交体系的一些缺点。

3. 我们的事情内容

   您只需供应用于挑选的钓饵质粒信息,我们会完成全部的挑选事情,重要包孕以下内容:
3.1 钓饵载体的构建
3.2 钓饵质粒的自激活检测
3.3 文库质粒和钓饵质粒共转酵母感受态细胞
3.4 文库挑选和3AT优化
3.5 文库挑选效果测序剖析
3.6 挑选效果回转考证
3.7 具体讲演的整顿和数据发送

4.托付效果

供应具体的、完好的实行讲演,清楚的实行图片,挑选效果的测序效果,质粒等。

5.服务报价

3.5万元整

6.服务周期

80个工作日

7.客户文章

核蛋白酵母双杂交文库客户文章示例:

【1】Yeast-2-Hybrid data file showing progranulin interactions in human fetal brain and bone marrow libraries[J],ata in Brief, Volume 9, December 2016, Pages 1060-1062

【2】Zhenhai Yu, Yingying Ge, Lei Xie,et al. Using a yeast two-hybrid system to identify FTCD as a new regulator for HIF-1α in HepG2 cells[J],Cellular Signalling, Volume 26, Issue 7, July 2014, Pages 1560-1566

【3】Zhanyang Yu,1 Ning Liu,1 Yi Wang,2 Xiaokun Li,et al. Identification of Neuroglobin-interacting Proteins Using Yeast Two-hybrid Screening. Neuroscience. 2012 Jan 3; 200: 99–105.

【4】Cui LG, Shan JX, Shi M, et al. DCA1 Acts as a Transcriptional Co-activator of DST and Contributes to Drought and Salt Tolerance in Rice. PLoS Genet. 11, e1005617 (2015).

【5】Jing Ning, Baocai Zhang, Nili Wang, Increased Leaf Angle1, a Raf-Like MAPKKK That Interacts with a Nuclear Protein Family, Regulates Mechanical Tissue Formation in the Lamina Joint of Rice. The Plant Cell, Vol. 23: 4334–4347, December 2011.

【6】Raksha Singh, Mi-Ok Lee, Jae-Eun Lee, Jihyun Choi, Rice Mitogen-Activated Protein Kinase Interactome Analysis Using the Yeast Two-Hybrid System. Plant Physiology, September 2012.Vol.160,

【7】X.F.Zha, M.Zhao, C.Y.Zhou, H.Z.Guo. Analysis of interaction between Bmhrp28 and BmPSI in sex-specific splicing of Bombyx mori Bmdsx gene. Genetics and Molecular Research 13 (3): 5452-5462 (2014)

【8】Chao Zhang, Rongchao Ge, Junwen Zhang, Identification and Expression Analysis of a Novel HbCIPK2-Interacting Ferredoxin from Halophyte H. brevisubulatum.PLOS. December 4, 2015.

【9】Deng X1, Guo D2, Yang S1, Shi M1, Chao J1, Li H2, Peng S2, Tian W1. Jasmonate signalling in the regulation of rubber biosynthesis in laticifer cells of rubber tree, Hevea brasiliensis. J Exp Bot. 2018 Jun 27;69(15):3559-3571. doi: 10.1093/jxb/ery169.


酵母单杂交文库客户文章示例:

【1】Nobutaka Mitsuda,Miho Ikeda,Shinobu Takada,et al.Efficient Yeast One-/Two-Hybrid Screening Using a Library Composed Only of Transcription Factors in Arabidopsis thaliana.Plant Cell Physiol (2010) 51 (12): 2145-2151.

【2】Chang-Qing Yang1, Xin Fang1, Xiu-Ming Wu1, et al. Transcriptional Regulation of Plant Secondary Metabolism. Journal of Integrative Plant Biology 2012, 54 (10): 703–712

【3】Zejun Huang, Zhijin Zhang, Xiuling Zhang,et al. Tomato TERF1 modulates ethylene response and enhances osmotic stress tolerance by activating expression of downstream genes. FEBS Letters.Volume 573, Issues 1–3, 27 August 2004, Pages 110-116

【4】Deng X1, Guo D2, Yang S1, Shi M1, Chao J1, Li H2, Peng S2, Tian W1. Jasmonate signalling in the regulation of rubber biosynthesis in laticifer cells of rubber tree, Hevea brasiliensis. J Exp Bot. 2018 Jun 27;69(15):3559-3571. doi: 10.1093/jxb/ery169.

膜蛋白双杂交文库客户文章示例:

【1】Yasuyuki Nakamura, Jun Ishii, Akihiko Kondo. Rapid, Facile Detection of Heterodimer Partners for Target Human G-Protein-Coupled Receptors Using a Modified Split-Ubiquitin Membrane Yeast Two-Hybrid System.PLOS one. June 2013 , Volume 8 ,Issue 6.

【2】Zhe Ma, Hui Zhang, Junxi Zheng. Interaction between M-Like Protein and Macrophage Thioredoxin Facilitates Antiphagocytosis for Streptococcus equi ssp. Zooepidemicus.PLOS one. February 2012 ,Volume 7, Issue 2.

【3】Pratima Pandey and Singh Harbinder. The Caenorhabditis elegans D2-like dopamine receptor DOP-2 physically interacts with GPA-14, a Gαi subunit. Pandey and Harbinder Journal of Molecular Signaling 2012.

 中文论文:

【1】张云云,周 君, 李 晔. 适口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)酵母双杂交文库和铁联合卵白实核表达载体的构建. 陆地取湖沼,44卷,第6期。

【2】欧阳沫, 唐潇,黄惜,袁红梅。巴西橡胶树HbICE1 基因酵母双杂交钓饵载体的构建及互做卵白的挑选。动物科学学报,2016,34(2): 255~262.

【3】岳珊珊,夏来新。酵母双杂交挑选取果蝇C(2)M相互作用的卵白。遗传,2015.11,37(11)

【4】专利:一种联合串连反复序列(TTTACAC)5的Dof蛋白质



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