基因组局限的CRISPR敲除(GeCKO)文库

产物简述

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基因组局限的CRISPR敲除(GeCKO)文库

基因组局限的CRISPR 敲除(GeCKO)文库可以或许正在人或小鼠细胞中快速发生功用缺失的突变体而且挑选所希冀的表型。我们将供应Broad研究所张峰实验室的全部GeCKO(8个)CRISPR文库*。 GeCKO文库是gRNA的混淆文库,能够正在人或小鼠的基因组内敲除任何表达基因及非表达的基因,如miRNA基因。革新后的GeCKO v2.0文库含有非靶向gRNA作为对比,与此同时用来转导的缓病毒载体也同步停止了晋级,以便更高效的富集病毒和提拔病毒正在本代细胞的转染效力。GeCKO文库曾经被普遍运用于本代的人或小鼠细胞,干细胞,癌细胞及种种稳固细胞系。 GeCKO文库许可客户正在差别的条件下审定任何细胞功用必需的基因,挑选哪个基因的缺失使癌细胞具有耐药性。要获得更多GeCKO文库设想、构建信息,请参考张峰实验室宣布的文献:Sanjana N.E., Shalem O., Zhang F. Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014 Aug;11(8):783-4. doi: 10.1038/nmeth.3047.

文库内容

文库称号

Human Library A

Human Library B

Mouse Library A

Mouse Library B

形貌65,383 sequences:
  • 19,050个基因,每3条sgRNA靶向1个基因;

  • 1,864个miRNA,每4条sgRNA靶向1个miRNA;

  • 1000条对比(非靶向性)sgRNAs

58,028 sequences:
  • 19,050个基因,每3条sgRNA靶向1个基因;

  • 1000条对比(非靶向性)sgRNAs

67,405 sequences:
  • 20,611个基因,每3条sgRNA靶向1个基因;

  • 1,175个miRNA,每4条sgRNA靶向1个miRNA;

  • 1000条对比(非靶向性)sgRNAs

62,804 sequences:
  • 20,611个基因,每3条sgRNA靶向1个基因;

  • 1000条对比(非靶向性)sgRNAs

GeCKO文库挑选

文库称号

载体

托付量

周期*

Human GeCKO Library A

pLentiCRISPR v2
(all-in-one vector)

25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Human GeCKO Library A


pLentiGuide-Puro
Accompanied by:
pLentiCas9-Blast


25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Human GeCKO Library B

pLentiCRISPR v2
(all-in-one vector)

25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Human GeCKO Library B


pLentiGuide-Puro
Accompanied by:
pLentiCas9-Blast


25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Mouse GeCKO Library A

pLentiCRISPR v2
(all-in-one vector)

25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Mouse GeCKO Library A


pLentiGuide-Puro
Accompanied by:
pLentiCas9-Blast


100 -900 μg**

8-10 weeks

*周期为工作日;**需求量能够100 µg为单元向上增添;接待征询,发送邮件中请备注阐明文库称号及响应的Cat.No.

托付效果

  • 文库(转染级)以25 μg为一个单元量。100 μg 及200 μg文库离别是以4 x 25 μg大概8 x 25 μg情势托付。 随文库发货附带技术指导,MSDS及COA 文件。

  • Mouse GeCKO Library A (dual vector): 100 μg混淆文库 (研讨级)

    • 需求量能够100 µg为单元向上增添,可扩大到900 µg(转染级)

    • 供应项目讲演,包孕小量测试(Step 1)所做Sanger测序的ABI文件及二代测序考证(Step 4)的统计择要;如您需求,借可供应完好可用的NGS原始数据。

GeCKO v2.0文库载体挑选

为了托付正在缓病毒载体上对细胞高效的GeCKO文库,运用单载体体系可以获得较大的病毒滴度;正在这个单载体体系中,S.pyogenesCas9(lentiCas9-Blast)和sgRNA(lentiGuide-Puro)离别运用了带有差别抗性挑选符号的单个病毒载体。同时,也能够运用all-in-one的lentiCRISPR v2载体,其具有比本来的lentiCRISPR载体下10倍的病毒滴度。

我们可供应以下有用运用的缓病毒载体以用于GeCKO文库挑选:

    lentiCRISPRv2 single vector lentiviral GeCKO systemlentiCas9-Blast + lentiGuide-Puro two-vector lentiviral GeCKO system

GeCKO载体汇总

载体称号gRNA 启动子All-in-one vector?挑选/挑选符号载体图谱

pLentiCRISPR v2

U6

是,EFS启动子启动Cas9表达,C端带DYK

AmpR, PuroR

pLentiCRISPR v2
vector map

pLentiGuide-Puro

U6

可,pLentiCas9-Blast载体免费供应,以用于共表达

AmpR, PuroR

pLentiGuide-Puro
vector map

怎样运用GeCKO文库

GeCKO文库是CRISPR gRNA的混淆文库,能够正在人或小鼠的基因组内敲除任何基因及非表达的基因,如miRNA基因。每条gRNA克隆到优化过的缓病毒载体中以实现高效率天转染本代细胞或造就细胞。GeCKO文库应以较低的MOI值转导细胞,以包管每一个细胞进入不超过1条gRNA。转染完成后正在停止文库挑选之前,应对细胞停止NGS深度测序,以评价gRNA正在细胞中的显示。文库挑选后,借需停止第二轮NGS测序并数据剖析,以审定正在挑选历程中缺失或富集的gRNA。经由过程GeCKO文库挑选找到真正的阳性克隆,您需审定哪些基因相对应的gRNA是被富集的。要获得关于GeCKO文库挑选更多流程,请参考Genome Engineering网站。

GeCKO v2.0文库特性

针对人类或小鼠基因组的每一个基因,GeCKO文库的设想包含:6条单链gRNA(sgRNA)和针对每一个miRNA的4条sgRNA,及1000条非靶向性的对比sgRNAs。

这些gRNA散布正在每一个基因凌驾3-4个构成型表达的外显子上,以此将脱靶效应降至尽量低。每一个文库均包孕两个子文库A和B.每个子文库皆离别包含针对每一个基因的3个独一的sgRNA;仅A文库包含可靶向1,864 个miRNAs中恣意一个miRNA的4条sgRNA。A和B子文库皆包含了1000个非靶向性的对比sgRNA.运用单个子文库可以或许掩盖基因组局限,但也削减了完成一次挑选所需求的细胞数目。当实行的细胞数目有限时(比方,本代细胞或体内挑选),那黑白常有效的;固然,如需更大的挑选能够经由过程联合两个子库去完成。


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