齐基因组获得性功用的挑选文库

产物简述

  • 产物详情

SAM文库强效激活转录 ——齐基因组获得性功用的挑选

SAM文库可强特异性激活基因组中编码基因的转录,用于正在人类细胞中停止功用获得性挑选。 CRISPR/Cas9协同转录激活调治子(SAM)是一种设想的卵白复合物,可以或许强效激活内源性基因的转录。掉活的Cas9核酸酶经由过程gRNA靶向于基因组中的特异性位点。SAM复合物包含3个转录激活构造域-VP64,P65和HSF1,可靶向于转录肇端位点上游200bp位点,从而起到协同增强下流基因转录的感化。SAM运用掉活的Cas9以确保不形成内源基因组的链断裂。人齐基因组SAM文库可激活RefSeq数据库 (23,430亚型)中的所有已知的编码亚型,以用于功用获得性的挑选。SAM文库曾经被普遍运用于本代的小鼠,人细胞,干细胞,癌细胞及种种稳固细胞系。SAM文库挑选许可客户正在差别条件下审定任何细胞存活必需的基因,和那些由于激活使癌细胞发生耐药性的基因。如需相识关于SAM文库设想&构建的完好信息,可检察文献:Konermann S*, Brigham MD*, Trevino AE, Joung J, Abudayyeh OO, Barcena C, Hsu PD, Habib N, Gootenberg JS, Nishimasu H, Nureki O & Zhang F. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, doi:10.1038/nature14136.

SAM文库内容

  • 70,290 gRNA序列;靶向人类基因组中23,430个差别的编码亚型,每3条sgRNA序列即靶向1个编码亚型

  • Human SAM 文库克隆至pLenti sgRNA(MS2)_zeo载体

  • 另随文库附上lenti dCas9-VP64_Blast及lenti MS2-P65-HSF1_Hygro两个质粒。


SAM文库托付

Cat. No.文库称号载体托付量+周期*
HKC070-1Human SAM Library

pLenti sgRNA(MS2)_zeo
pLenti dCas-VP64_Blast
pLenti MS2-P-HSF1_Hygro

1 μg

5-7

HKC070-25

25 μg

5-7

HKC070-100

100 μg

5-7

HKC070-200

200 μg

5-7

HKC074Customized Human SAM Library

pLenti sgRNA(MS2)_zeo
pLenti dCas-VP64_Blast
pLenti MS2-P-HSF1_Hygro

100 μg-900 μg**

8-10 weeks

+ 文库以25 μg为单元托付;4 x 25 μg(100 μg 文库)或8 x 25 μg (200 μg 文库);*托付周期为工作日;**需求量能够100 µg为单元向上增添。

怎样运用SAM文库,用于功用获得性的挑选

SAM文库是CRISPR gRNA 混淆文库,间接靶向基因组每个转录肇端位点的上游。

关于SAM 功用获得性的挑选,人齐基因组的SAM sgRNA文库需取别的两个SAM元件联合,即dCas9-VP64 取MS2-P65-HSF1,那三个SAM元件配合转导入细胞中。为适于共转导及挑选,三个缓病毒载体皆有各自的抗性符号。三个元件皆是以缓病毒载体情势托付,且病毒载体都是经由优化的,可以或许复制高滴度,以有用转导本代细胞或造就细胞系。SAM 文库以较低的MOI值转导到细胞群中,以包管每一个细胞进入不超过1条gRNA。转导完成后正在停止文库挑选之前,应对细胞停止NGS深度测序,以评价gRNA正在细胞中的显示。挑选完成后,停止第二轮NGS测序并数据剖析,用于审定挑选历程中丧失或富集的gRNA。为了挑选到SAM文库中的阳性克隆,您需对多个富集gRNA的基因停止审定。更多SAM挑选流程,请参考SAM/Genome Engineering网站。

SAM 文库组成

SAM复合物由三局部组成:

  • 核酸酶活性掉活的Cas9-VP64融会卵白

  • sgRNA,其构成的茎环局部包含了两个MS2 RNA适配子

  • MS2-P65-HSF1激活辅佐卵白

三个差别的激活构造域- VP64, P65 and HSF1, 协同激活转录

三个元件皆由零丁的缓病毒载体编码。 所有三个载体必需共转染进细胞才气使得SAM发挥作用 人齐基因组的SAM gRNA文库序列可点击这个.csv文件中获得

SAM文库载体

我们托付的SAM文库是一个混淆文库,包含:sgRNA克隆到gRNA缓病毒表达载体,和需求配合转导的dCas9-VP64 和 MS2-p65-HSF1缓病毒表达载体。

载体称号挑选符号载体图谱

lenti sgRNA(MS2)_zeo

Zeo

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lenti dCas9-VP64_Blast

Blast


lenti MS2-P65-HSF1_Hygro

Hygro

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