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SILAC服务

产物简述

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SILAC服务

产物界说

细胞培养氨基酸稳固同位素标记(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC),这种方法起首是由2002年丹麦Mann实验室的Ong等对AACT手艺做了进一步改进而得到,并初次应用于定量蛋白质组学研讨,为周全、体系天定性和定量分析庞大哺乳动物细胞蛋白质组供应了有用的解决方案。

手艺道理

离别用自然同位素(轻型)或稳固同位素(重型)符号的必须氨基酸庖代细胞培养基中响应氨基酸,细胞经5-6代倍增周期后,稳固同位素标记的氨基酸完整掺入到细胞新分解的蛋白质中替换了原有氨基酸。差别符号细胞的裂解蛋白质按细胞数或卵白量等比例混淆,经星散、纯化后停止量谱审定。


实行流程

正文:“SDS-PAGE分级”处也可选择酶解后正在肽段水平停止分级。

运用仪器

Thermo Scientific Q Exactive

技术优势

细胞培养时掺入符号,减小实行偏差,定量更正确。

应用领域

疾病标记物挑选              感化机制研讨

药物感化靶点研讨           特别功用蛋白质挑选

样品要求

样品范例

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度>1μg/μl,蛋白质总量 >300μg

细胞样品

细胞量>107

手艺参考案例

[1]       Kim JY, Welsh EA, et al. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(30): 12414-9.

[2]       Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun. 2014; 5: 3319.

[3]       Ravikumar V, Shi L, et al. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics. 2014 Jan 5.

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蛋白质组学

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