抑止性消减杂交(SSH)文库构建

尽人皆知,生物体种种生命运动情势皆和基因的时空表达差别相干,经由过程对照同种构造、脏器正在差别心理状况下或正在差别生长发育阶段的基因表达差别,可为剖析生命运动历程供应主要信息。现在曾经有许多分子生物学手艺可用于研讨基因表达差别,个中Diatchenko L等1996年竖立的抑止性消减杂交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假阳性率低、灵敏度下、低配景、重复性强和检测局限广等长处敏捷获得普遍运用,已胜利用于差别细胞株、差别器官构造、个别差别发育阶段和机体正在外界因子感化下差别表达基因,研讨工具触及细菌、病毒、细胞、植物、动物和人类等。海内近几年来运用SSH手艺展开的研讨也异常活泼,触及范畴相称普遍。


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抑止性消减杂交(SSH)文库构建

一、手艺引见

尽人皆知,生物体种种生命运动情势皆和基因的时空表达差别相干,经由过程对照同种构造、脏器正在差别心理状况下或正在差别生长发育阶段的基因表达差别,可为剖析生命运动历程供应主要信息。现在曾经有许多分子生物学手艺可用于研讨基因表达差别,个中Diatchenko L1996年竖立的抑止性消减杂交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假阳性率低、灵敏度下、低配景、重复性强和检测局限广等长处敏捷获得普遍运用,已胜利用于差别细胞株、差别器官构造、个别差别发育阶段和机体正在外界因子感化下差别表达基因,研讨工具触及细菌、病毒、细胞、植物、动物和人类等。海内近几年来运用SSH手艺展开的研讨也异常活泼,触及范畴相称普遍。

 

  SSH手艺基本原理:SSH手艺应用抑止性PCR能选择性扩增差别歉度差别基因和cDNA 消减杂交特性,应用杂交二级动力学道理(即高丰度序列退火时发生同源杂交的速度大于低丰度序列),使本来差别歉度的DNA序列相对含量趋于同等。然后应用抑止性PCR特性,两头接上统一讨论的非目标基因片断因为具有反向反复序列,正在退火时轻易构成发夹互补构造,正在PCR中不克不及作为模板取引物配对扩增,从而选择性扩增目标基因而抑止非目标基因片断扩增。消减杂交扣除了实验组和对比组之间同源序列,再联合抑止性PCR的动力学富集,实现高效星散低丰度特异性非同源片断。如下图:

 

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二、手艺用处

我们能够应用这类有用的手艺去对照两个mRNA群体,并得到只正在一个群体中过量表达或特异性表达的基因的cDNA

我公司接纳Clontech公司 PCR-SelectTM cDNA Subtraction Kit构建差加文库,操纵精准、经验丰富,已完成上百个SSH文库的构建(包孕动物构造、植物构造、临床样本、微生物等种种样本)


三、托付效果

我们的SSH消减文库,托付的产物以下:

 

产品名称

托付保准

包装情势

贮存前提

消减产品

(正、反向消减文库)

100ul

 

1.5ml螺旋管

-80

消减文库PCR产品

(正、反向消减文库)

大于20ul

1.5ml螺旋管

-80

消减文库甘油菌

(正、反向消减文库)

1.5ml

均匀插入片断>300bp

1.5ml螺旋管

-80

文库构建图片

电子版

JPG花样

常温

文库构建讲演

电子版

PDF花样

常温

四、服务工夫

25个工作日内。

五、质料要求

客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库,由客户供应构造、细胞或总RNA给我们便可:
 细胞样本:细胞数目大于1*10^7 
 植物样本:大于1g 
 动物样本:大于2g 
 RNA:大于200ug 
  
六、客户案例

现在我们曾经胜利完成2000多个的文库构建,重要客户为中国科学院上海动物心理生态研究所、上海交通大学、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单元完成酵母单(单)杂交文库构建服务,物种包孕人、小鼠、大鼠、水稻、拟南芥、牡丹、稻飞虱、苹果、油菜、小麦、贝壳、葡萄、真菌等。

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