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缓病毒包装

缓病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺点1型病毒)为根蒂根基生长起来的基因治疗载体。具有熏染谱普遍、能够有用熏染破裂期和静止期细胞、临时稳固表达中源基因等长处,因而成为导入中源基因的有力东西。如今缓病毒体系曾经被普遍应用到种种细胞系的基因过表达、RNA滋扰、microRNA研讨和活体植物实行中。

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      缓病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺点1型病毒)为根蒂根基生长起来的基因治疗载体。具有熏染谱普遍、能够有用熏染破裂期和静止期细胞、临时稳固表达中源基因等长处,因而成为导入中源基因的有力东西。如今缓病毒体系曾经被普遍应用到种种细胞系的基因过表达、RNA滋扰、microRNA研讨和活体植物实行中。

 

 

病毒服务项目

 

      海科生物供应缓病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和滋扰缓病毒包装和基于缓病毒手艺的稳固细胞系构建服务。

   

 

整体实行流程

 

(一) 实行流程(1、2、3为并列步调)

 

      1. 缓病毒过表达质粒载体的构建 设想上下流特异性扩增引物,同时引入酶切位点,接纳PCR手艺(接纳高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒大概文库)调取目标基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入缓病毒过表达质粒载体。

 

     2. 缓病毒滋扰质粒载体的构建 分解siRNA对应的DNA颈环构造,退火后连入慢病毒滋扰质粒载体。

 

     3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因响应的Mir 前体, 并正在调取引物中引入酶切位点。

 

     4. 缓病毒载体的包装取稀释纯化 制备缓病毒穿越质粒及其辅佐包装原件载体质粒(两质粒包装体系),三种质粒载体离别停止下纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 改换为完整培养基,造就48和72h后,离别收集富含缓病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液经由过程超离心稀释病毒。

 

(二)流程图

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供应产物

 

产品名称病毒滴度规格赠予阴性对比病毒规格
过表达缓病毒>10^8 PFU/ml1ml1ml(>10^8 PFU/ml
滋扰缓病毒>10^8 PFU/ml1ml1ml(>10^8 PFU/ml)

 

 参考文献

   1、MicroRNA-30 family members regulate calcium/calcineurin signaling in podocytes

     (2016年宣布于JCI,作者:刘志红)

   2TGF-β1 promotes osteosarcoma cell migration and invasion through the miR-143-versican pathway

     (2014年宣布于Cellular Physiology and Biochemistry,作者:Shaohua Li and Tao Cheng

   3、miR-451a Inhibited Cell Proliferation and Enhanced Tamoxifen Sensitive in Breast Cancer via Macrophage Migration Inhibitory Factor

     (2015年宣布于BioMed Research International,作者:李红)

   4、Smad4 mediated BMP2 signal is essential for the regulation of GATA4 and Nkx2. 5 by affecting the histone H3 acetylation in H9c2 cells

     (2014年宣布于Biochemical and Biophysical Research Communications,作者:田杰)

   5Effects and mechanism of downregulation of COX‑2 expression by RNA interference on proliferation and apoptosis of human breast cancer MCF‑7 cells

     (2014年宣布于Molecular Medicine Reports,作者:hui Han)

   6MicroRNA-486-5p targeting PIM-1 suppresses cell proliferation in breast cancer cells

     (2014年宣布于Tumor Biology,作者:Zhenlin Yang)


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