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Crispr/Cas9 基因编纂缓病毒包装

海科生物研发出缓病毒Cas9表达系统,该系统接纳缓病毒系统先在细胞中稳固表达Cas9卵白,构建稳固表达Cas9卵白的细胞系,再正在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实行顶用到的别的原件用于特异性基因敲除。

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服务简介

 

 

       Cas9卵白的CDS长达4kb,克隆难度和包毒难度皆相对大,将Cas9基因高效导入细胞是运用Cas9/CRISPR体系停止基因敲除的难点之一,极大天限定可供挑选的将基因导入细胞的要领。而且正在用CRISPR/Cas9体系停止基因敲除时,借需求同时转入辨认靶点的gRNA,挑选阳性细胞的抗性基因或荧光基因,用同源重组法停止基因敲除,借需求导入同源重组模板。云云多的基因配合表达,很难过到较高的基因编纂效力,形成后续的阳性克隆挑选和检测事情难度大。

 

       海科生物研发出缓病毒Cas9表达系统,该系统接纳缓病毒系统先在细胞中稳固表达Cas9卵白,构建稳固表达Cas9卵白的细胞系,再正在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实行顶用到的别的原件用于特异性基因敲除。

 

 

产物上风

 

 

a、实行方案设计更天真。因为没必要表达大卵白Cas9,能够凭据细胞特性挑选化学转染、腺病毒、腺相干病毒等多种要领导入或敲除相干基因;

 

b、进步基因敲除效力。正在稳固表达Cas9卵白的细胞系上停止基因敲除比瞬时转染Cas9停止基因敲除的效力更高;

 

c、可对统一细胞停止多个基因敲除实行。关于需求正在同一个细胞系中停止多个基因的编纂或需求临时用一个细胞模子停止多项基因研讨,先构建一个Cas9卵白稳固表达的细胞系可明显进步后续实行的效力,低落实行难度。

 

 

 

服务特性

 

 

a、适用于正在同一个细胞系中需求停止多个基因敲除的实行;

b、基因敲除效力比间接质粒转染更高;

c、供应多种差别荧光和抗性符号的缓病毒表达载体,更易挑选到基因敲除胜利细胞;

d、接管cas9卵白稳固表达差别细胞系定制。

 

 

服务流程

 

 

 

 

A、cas9载体构建及缓病毒包装

     将cas9基因CDS区克隆至缓病毒载体,并停止cas9缓病毒包装。

 

B、稳固株挑选

     将cas9缓病毒感染特定的目标细胞,停止cas9稳固表达的细胞株挑选。

 

 

参考文献

   1、MicroRNA-30 family members regulate calcium/calcineurin signaling in podocytes

     (2016年宣布于JCI,作者:刘志红)

   2TGF-β1 promotes osteosarcoma cell migration and invasion through the miR-143-versican pathway

     (2014年宣布于Cellular Physiology and Biochemistry,作者:Shaohua Li and Tao Cheng

   3、miR-451a Inhibited Cell Proliferation and Enhanced Tamoxifen Sensitive in Breast Cancer via Macrophage Migration Inhibitory Factor

     (2015年宣布于BioMed Research International,作者:李红)

   4、Smad4 mediated BMP2 signal is essential for the regulation of GATA4 and Nkx2. 5 by affecting the histone H3 acetylation in H9c2 cells

     (2014年宣布于Biochemical and Biophysical Research Communications,作者:田杰)

   5Effects and mechanism of downregulation of COX‑2 expression by RNA interference on proliferation and apoptosis of human breast cancer MCF‑7 cells

     (2014年宣布于Molecular Medicine Reports,作者:hui Han)

   6MicroRNA-486-5p targeting PIM-1 suppresses cell proliferation in breast cancer cells

     (2014年宣布于Tumor Biology,作者:Zhenlin Yang)


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